Rekombinant Cryptostatin Proteininin ve Cryptopain 1 Sistein Proteazının Aktivitelerinin Belirlenmesi
Zeynep Erdem Aynur1, Bülent Bozdoğan21Aydın Adnan Menderes Üniversitesi, Rekombinant DNA ve Rekombinant Protein Merkezi, Aydın, Türkiye2Aydın Adnan Menderes Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, Aydın, Türkiye
GİRİŞ ve AMAÇ: Cryptosporidium türlerinin neden olduğu kriptosporidiyoz, tüm dünyada oldukça yaygın olarak bulunan zoonotik bir hastalıktır. Cryptosporidium parazitinin önemli bir virülans faktörü olan cryptopain sistein proteaz, cryptostatin ise sistein proteaz inhibitörüdür. Sistein proteazlar birçok parazitte önemli rol üstlenen virülans faktörleridir ve bundan dolayı ilaç tasarımları için belirlenen hedefler arasında yer alırlar. Bu çalışmada Cryptosporidium parvum’da bulunan cryptopain-1 ve cryptostatin genlerinin klonlanması ve etkilerinin değerlendirilmesi amaçlanmıştır.
YÖNTEM ve GEREÇLER: Cryptosporidium spp. şüpheli hayvanlardan alınan dışkılardan modifiye Kinyoun asit-fast boyaması yapılmış, etken pozitif olarak değerlendirilen örneklerden DNA izolasyonu gerçekleştirilmiştir. Örneklerden cryptopain ve cryptostatin genleri klonlanmıştır. Klonlamanın ardından, total protein ekstraktı hazırlanmış ve purifiye edilmiştir. Saflaştırılan proteinler SDS-Page görüntüleme yöntemiyle değerlendirilmiştir. Saf olarak elde edilen cryptopain ve cryptostatinin, jelatinaz aktivitesi, %3 jelatin içeren besiyerinde test edilmiştir. Aynı zamanda değişik pH ve sıcaklıkta cryptopain ve cryptostatinin aktivitesi test edilmiştir.
BULGULAR: Sistein proteaz olan cryptopain’de jelatinaz aktivitesi saptanırken, inhibitörü olan cryptostatin’de ve kontrol grubunda jelatinaz aktivitesi saptanmamıştır. Saflaştırılan proteinlerin IgG ve BSA degradasyonu değerlendirmelerinde ise cryptopain-1’in her iki proteini de farklı sıcaklık ve pH değerlerinde degrade ettiği tespit edilmiştir. Cryptostatinin ise değişik ısı ve pH değerlerinde cryptopain aktivitesini engellemiştir.
TARTIŞMA ve SONUÇ: Rekombinant cryptostatinin Cryptosporidium parvum proteazlarının inhibisyonunda ve enfeksiyonlarında önleyici olarak kullanılma potansiyeli vardır.
Determination of the Activities of Recombinant Cryptostatin Protein and Cryptopain 1 Cysteine Protease
Zeynep Erdem Aynur1, Bülent Bozdoğan21Aydın Adnan Menderes University Recombinant DNA and Recombinant Protein Center, Aydın, Türkiye2Aydın Adnan Menderes University, Faculty of Medicine, Department of Medical Microbiology, Aydın, Türkiye
INTRODUCTION: Cryptosporidiosis, caused by Cryptosporidium species, is a common zoonotic disease all over the world. Cryptopain, an important virulence factor of Cryptosporidium spp., is a cysteine protease inhibitor, and cryptostatin is a cysteine protease inhibitor. Cysteine proteases are virulence factors that play an important role in many parasites and are therefore among the targets for drug designs.
METHODS: Modified Kinyoun acid-fast staining was performed using the feces of animals that may harbor Cryptosporidium spp., and DNA isolation was performed from the positive samples. Cryptopain-1 and cryptostatin genes were cloned. After cloning, total protein extract was prepared and purified. Purified proteins were evaluated by SDS-Page imaging. Gelatinase activity of purely obtained cryptopain and cryptostatin were tested on medium containing three percent gelatin. Moreover, the activities of cryptopain and cryptostatin at different pH and temperature were tested.
RESULTS: Our results showed that recombinant cryptopain, a cysteine protease, had gelatinase activity, however in presence of recombinant cryptostatin and control group, no gelatinase activity was observed. In the IgG and BSA degradation evaluations of the purified proteins, it was determined that cryptopain-1 degraded both proteins at different temperatures and pH values. Cryptostatin inhibited cryptopain activity at different temperatures and pH values.
DISCUSSION AND CONCLUSION: Recombinant cryptostatin has potential for the inhibition of Cryptosporidium parvum proteases and prevention of infections.
Sorumlu Yazar: Zeynep Erdem Aynur, Türkiye
| ARAÇLAR |
 Tam Metin PDF Yazdır Alıntıyı İndir RIS EndNote BibTex Medlars Procite Reference Manager E-Postala Paylaş Yazara e-posta gönder
Benzer makaleler Google Scholar |