Blastocystis sp., Cryptosporidium sp. ve Giardia intestinalis’in Multipleks Polimeraz Zincir Reaksiyonu ile Tanısı: Optimizasyon Çalışması
Ali Ahmet Kilimcioğlu1, Nogay Girginkardeşler1, Tuba Oyur1, Selin Bölük Sabuncu1, Didem Düzyol Azak1, Serhan Görgün2, Işın Akyar3, Özgür Kurt3, Tanıl Kocagöz3, Ahmet Özbilgin11Manisa Celal Bayar Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Parazitoloji Anabilim Dalı, Manisa2Manisa Celal Bayar Üniversitesi Fen Edebiyat Fakültesi Biyoloji Bölümü, Manisa
3Acıbadem Mehmet Ali Aydınlar Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, İstanbul
Amaç: Özellikle immun sistemi baskılanmış hastalar ve çocuklarda şiddetli gastrointestinal sistem yakınmalarına yol açabilen Blastocystis sp., Cryptosporidium sp. ve Giardia intestinalis’in tanısı için yerli hastalardan elde edilen izolatlarla yeni bir Multipleks Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PZR) protokolünün geliştirilmesi amaçlanmıştır.
Yöntem: Mikroskobik incelemesinde yoğun miktarlarda Blastocystis sp., Cryptosporidium sp. ve Giardia intestinalis saptanan farklı hastalara ait üç dışkı örneğinden ticari bir kit ile DNA izolasyonu yapılmıştır. Önce her bir protozoona karşı özel PZR protokolü geliştirilmiştir. Sonrasında bu üç protozoonun birlikte tanı konabildiği multipleks PZR protokolü optimize edilmiştir.
Bulgular: DNA izolasyonu sonrası gerçekleştirilen multipleks PZR protokolünde Cryptosporidium sp., Blastocystis sp. ve G. intestinalis için sırasıyla 95 bp, 227 bp ve 258 bp’lik bantlar elde edilmiştir.
Sonuç: Geliştirilen özgün protokolle Cryptosporidium sp., Blastocystis sp. ve G. intestinalis’in multipleks PZR ile tanısı gerçekleştirilmiştir. Parazitolojik incelemelerde farklı yöntemlerin kullanılmasındaki zorluklar nedeniyle, optimize edilen bu protokole halk sağlığı için önemli olan diğer protozoonların da eklenmesiyle, çok sayıda parazitin tek bir moleküler yöntemle saptanması mümkün hale gelebilecektir.
Diagnosis of Blastocystis sp., Cryptosporidium sp., and Giardia intestinalis by Multiplex PCR: An Optimization Study
Ali Ahmet Kilimcioğlu1, Nogay Girginkardeşler1, Tuba Oyur1, Selin Bölük Sabuncu1, Didem Düzyol Azak1, Serhan Görgün2, Işın Akyar3, Özgür Kurt3, Tanıl Kocagöz3, Ahmet Özbilgin11Department of Medical Parasitology, Faculty of Medicine, Manisa Celal Bayar University, Manisa, Turkey2Department of Biology, Faculty of Science and Letters, Manisa Celal Bayar University, Manisa, Turkey
3Department of Medical Microbiology, Faculty of Medicine, Acibadem Mehmet Ali Aydinlar University, İstanbul
Objective: It was aimed to develop a new Multiplex Polymerase Chain Reaction (PCR) protocol with isolates obtained from local patients for the diagnosis of Blastocystis sp., Cryptosporidium sp. and Giardia intestinalis, which can cause severe gastrointestinal system complaints especially in immunocompromised patients and children.
Method: DNA isolation was performed with a commercial kit from three stool samples of different patients whose microscopic examination showed dense amounts of Blastocystis sp., Cryptosporidium sp. and Giardia intestinalis. First, a special PCR protocol has been developed for each protozoon. Then, the multiplex PCR protocol, in which these three protozoa can be diagnosed together, was optimized.
Results: In the multiplex PCR protocol performed after DNA isolation, bands of 95 bp., 227 bp. and 258 bp. were obtained for Cryptosporidium sp., Blastocystis sp. and G. intestinalis, respectively.
Conclusion: Blastocystis sp., Cryptosporidium sp. and Giardia intestinalis were diagnosed by multiplex PCR with the original protocol developed. Due to the difficulties in using different methods in parasitological examination, by adding other protozoa important for public health to this optimized protocol, it will be possible to detect a large number of parasites with a single molecular method.
Sorumlu Yazar: Ali Ahmet Kilimcioğlu, Türkiye
| ARAÇLAR |
 Tam Metin PDF Yazdır Alıntıyı İndir RIS EndNote BibTex Medlars Procite Reference Manager E-Postala Paylaş Yazara e-posta gönder
Benzer makaleler Google Scholar |