Leishmania spp. Plasmodium spp. ve Toxoplasma gondii’nin Gerçek Zamanlı Polimeraz Zincirleme Tepkimesi ile Tanısı: Limit Saptama Pilot Çalışması
Tuba Oyur1, Özgür Kurt2, İbrahim Çavuş1, Ahmet Ozbilgin11Manisa Celal Bayar Üniversitesi Tıp Fakültesi, Tıbbi Parazitoloji Ana Bilim Dalı, Manisa2Acıbadem Mehmet Ali Aydınlar Üniversitesi Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı, İstanbul
GİRİŞ ve AMAÇ: Kan ve dokularda yerleşen paraziter hastalıklar insan sağlığı için büyük tehlike oluşturmaktadır. Sıtma, leishmaniasis ve toksoplazmoz her yıl çok sayıda kişinin hayatını kaybetmesine neden olmakta, tedavi maliyetleri ve iş gücü kaybı nedeniyle ülke ekonomilerine büyük yük getirmektedir.
Bu çalışmada, Plasmodium spp., Leishmania spp. ve Toxoplasma gondii’nin Gerçek Zamanlı Polimeraz Zincir Reaksiyonu (GZ-PZR) ile klinik örneğin mikrolitresinde tespit edilebilecek en düşük parazit sayısının belirlenmesi, test validasyonlarının yapılması ve GZ-PZR testinin rutin laboratuvarlara dahil edilmesi amaçlanmıştır.
YÖNTEM ve GEREÇLER: Leishmania tropica (promastigot ve amastigot), L. infantum (promastigot ve amastigot), T. gondii Thoma lamı ile mikroskop altında sayılarak P. falciparum ve P. vivax ise yayma preparatlar hazırlanıp giemsa ile boyandıktan sonra mikroskop altında incelenerek parazitemi yoğunluğu saptanmıştır. Daha sonra bu parazitlerin PBS solüsyonu ile mikrolitrede 1, 5, 10, 25, 50, 100, 500, 1000, 2500, 5000 ve 10.000 parazit olacak şekilde dilüsyonları yapılmıştır. Tüm parazit süspansiyonlarından DNA izolasyonu yapılarak GZ-PZR ile pozitif sonuç alınan en düşük parazit süspansiyonu tespit edilmiştir. Daha sonra da negatif sonuç alınan süspansiyon ile bir önceki pozitif süspansiyon arası tekrar dilüsyon yapılarak testin saptayabildiği en düşük parazit sayısı belirlenmiştir.
BULGULAR: GZ-PZR testinde P. falciparum ile L. tropica ve L. infantum’un promastigot ve amastigot formlarında en düşük parazit sayısı 10, P. vivax ve T. gondii parazitlerinde ise 12 olarak bulunmuştur.
TARTIŞMA ve SONUÇ: Leishmania spp., Plasmodium spp. ve T. gondii’nin GZ-PZR ile tanısında çok düşük sayıdaki parazitlerin başarı ile saptanması, bu testin her üç parazitin moleküler tanısında güvenle kullanılabileceğini düşündürmüştür.
Diagnosis of Leishmania spp., Plasmodium spp. and Toxoplasma gondii with Polymerase Chain Reaction: Limit Determination Pilot Study
Tuba Oyur1, Özgür Kurt2, İbrahim Çavuş1, Ahmet Ozbilgin11Department of Parasitology, Faculty of Medicine Manisa Celal Bayar University, Manisa, Turkey2Department of Medical Microbiology, Acibadem Mehmet Ali Aydinlar University School of Medicine, Istanbul, Turkey
INTRODUCTION: Parasitic diseases that involve blood and tissues pose a significant threat to human health. Malaria, leishmaniasis and toxoplasmosis kill thousands of people worldwide annually, and create a great burden on national economies due to treatment costs and loss of labour power of people.
The aims of this study are to determine the lowest number of parasites which is detectable by Real Time Polymerase Chain Reaction for Plasmodium spp., Leishmania spp. and T. gondii and to validate the RT-PCR test, and add RT-PCR in routine laboratories applications.
METHODS: Leishmania tropica and L. infantum (promastigotes and amastigotes), T. gondii were counted by a haemocytometer, while Giemsa-stained smears of P. falciparum and P. vivax were examined under the microscope to define their parasitic load. Then, dilutions as 1, 5, 10, 25, 50, 100, 500, 1000, 2500, 5000 and 10000 parasites/ul were prepared in PBS solutions. DNA isolation was performed from all parasite suspensions and the lowest parasite suspension which was positively detected by RT-PCR method was identified. This was followed by further dilutions between the first negative and last positive dilutions, to further determine the lowest number of RT-PCR could eventually identify.
RESULTS: Our assessments showed that the lowest number of parasites necessary for positive RT-PCR were 10 for P. falciparum and amastigotes and promastigotes forms of L. tropica/L. infantum, while 12 for P. vivax and T. gondii.
DISCUSSION AND CONCLUSION: These results show that RT-PCR is a reliable diagnostic option for the detection of Leishmania spp., Plasmodium spp. and T. gondii, even for infections with low parasitemia.
Sorumlu Yazar: İbrahim Çavuş, Türkiye
| ARAÇLAR |
 Tam Metin PDF Yazdır Alıntıyı İndir RIS EndNote BibTex Medlars Procite Reference Manager E-Postala Paylaş Yazara e-posta gönder
Benzer makaleler Google Scholar |