Türkiye’den Elde Edilen Kutanöz Leishmaniasis Etkeni İzolatların Sıvı Besiyerlerindeki Üremelerinin Karşılaştırılması
Yalçın Demir, ibrahim Çavuş, Ahmet ÖzbilginManisa Celal Bayar Üniversitesi Tıp Fakültesi, Tıbbi Parazitoloji Ana Bilim Dalı, ManisaGİRİŞ ve AMAÇ: Bu proje, moleküler araştırmalarda, izoenzim analizlerinde ve ilaç çalışmalarında kullanılabilecek olan Leishmania promastigotlarını en kısa sürede en fazla üreten sıvı besiyerini saptamak amacıyla planlanmıştır.
YÖNTEM ve GEREÇLER: Sıvı azot tankında saklanan, Türkiye’deki kutanöz leishmaniasis (KL) hastasından elde edilen Leishmania spp. suşları uygun ortamda çıkarılıp canlandırılmış ve Novy-McNeal-Nicolle (NNN) besiyerine ekimleri yapılmıştır. NNN besiyerinde üretilen izolatlar çalışmaya alınmıştır. Üremeleri sağlanan izolatların gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu yardımıyla internal transcribed spacer-1(ITS-1) gen bölgesine özgü primer ve problar ile genotiplemeleri yapılmıştır. Türkiye’deki KL hastalarından elde edilen ve yapılan genotipleme sonucu Leishmania tropica, L. major ve L. infantum/donovani olarak tür tayinleri yapılan izolatlardan birer tanesi çalışmaya alınmış ve RPMI 1640, M199, Schneiders Medium, Nutrient Broth, Brain Heart Broth besiyerlerine ekimleri yapılmıştır. Ekimleri yapılan besiyerleri Thoma lamı yardımıyla 12 gün boyunca kontrolleri yapılarak üreme yoğunlukları hesaplanmıştır.
BULGULAR: Türkiye’deki KL hastalarından elde edilmiş ve tür tayini yapılmış L. tropica, L. major ve L. infantum/donovani izolatlarının 8. günden itibaren RPMI 1640 besiyerindeki üreme yoğunluğu M199, Schneiders Medium, Nutrient Broth, Brain Heart Broth besiyerlerine göre daha fazla olduğu görülmüştür (p<0.05). Ekim yapılan promastigotların her 3 tür içinde 10. günden sonra kullanılacak yoğunluğa ulaştığı görülmüştür.
TARTIŞMA ve SONUÇ: Türkiye’den izole edilen KL etkeni Leishmania türlerinde çok sayıda Leishmania promastiogotuna gereksinim olduğu durumlarda en iyi sıvı besiyerinin RPMI 1640 olduğu saptanmıştır. Daha sonra ise sırasıyla M199, Schneiders Medium, Brain Heart Broth ve Nutrient Broth besiyerlerinin tercih edilmesinin uygun olacağı kanısına varılmıştır.
The Comparison of Reproductions of Isolates, Obtained in Turkey, with Cutaneous Leishmaniasis in Liquid Culture Media
Yalçın Demir, ibrahim Çavuş, Ahmet ÖzbilginDepartment of Medical Parasitology, Manisa Celal Bayar University, TurkeyINTRODUCTION: The aim of this study is to ascertain the liquid culture medium reproducing Leishmania promastigotes, to be used in molecular studies, isoenzyme analyses and drug studies, at most and within the shortest time.
METHODS: Leishmania spp. strains stored in liquid nitrogen were vitalized in an appropriate occasion and inoculated into NNN culture medium. The isolates reproduced in the culture medium were genotyped via the method of real time polimerase chain reaction with primers and probes spesific to internal transcribed spacer-1 sequence. The isolates, obtained from the patients with cutaneous leishmaniasis in Turkey and determined as Leishmania tropica, L.major and L.infantum/donovani in the wake of genotyping, were inoculated into RPMI 1640, M199, Schneiders Medium, Nutrient Broth and Brain Heart (infusion) Broth culture media. Inoculated culture media were controlled on every day up to 12th day after inoculation and reproduction density of those was assessed in Thoma slide.
RESULTS: It is observed that Leishmania tropica, L.major and L.infantum/donovani isolates, obtained from the patients with cutaneous leishmaniasis in Turkey, can be reproduced in RPMI 1640 culture medium better than M199, Schneiders Medium, Nutrient Broth, Brain Heart Broth culture media, used in the study, with much more promastigote reproduction for all Leishmania spp. beginning from 8th day (p<0.05).
DISCUSSION AND CONCLUSION: It was ascertained that the best liquid culture medium is RPMI 1640 if promastigote reproduction of Leishmania spp., causing cutaneous leishmaniasis, obtained from Turkey is needed at most. Later on, it was concluded that M199, Schneiders Medium, Brain Heart Broth and Nutrient Broth mediums would be suitable.
Sorumlu Yazar: ibrahim Çavuş, Türkiye
| ARAÇLAR |
 Tam Metin PDF Yazdır Alıntıyı İndir RIS EndNote BibTex Medlars Procite Reference Manager E-Postala Paylaş Yazara e-posta gönder
Benzer makaleler Google Scholar |