pADU94, kloramfenikol direncine sahip klonlama ve ekspresyon vektörü
Hanife Salih, Erman ORYASIN, BÜLENT BOZDOGANAydın Adnan Menderes Üniversitesi Rekombinant DNA ve Rekombinant Protein Uygulama ve Araştırma Merkezi (REDPROM), AydınGİRİŞ ve AMAÇ: Günümüzde, beta laktam direnç genlerinin karakterizasyonu ve özelliklerinin klonlama yoluyla araştırılması için vektör ihtiyacı bulunmaktadır. Bu çalışmanın amacı, beta-laktam direnç genlerininin klonlanmasını sağlayacak vektör yetersizliğini ortadan kaldırmaktadır.
YÖNTEM ve GEREÇLER: Geleneksel restriksiyon yöntemiyle vektör konstrüksiyonundan farklı olarak, pUC19 plazmidindeki beta-galaktozidaz direnç geni dışlanarak PCR yoluyla vektör iskeleti oluşturulmuştur ve kloramfenikol direnç geni yerleştirilmiştir. İnşa edilen pADU94 vektörünün işlevselliğinin incelenmesi amacıyla bla, gfp ve tsst klonlamaları yapılmıştır.
BULGULAR: İnşa edilen pADU94 vektörünün hücreye plazmidik kloramfenikol direnç kazandırdığı tespit edilmiştir. pADU94 vektörüne bla’nin klonlanması ile hücreye plazmid beta laktam direnci kazandırılmıştır. tsst’nin klonlaması ile mavi beyaz seçilim yapılabileceği, gfp klonlanması ile vektörün klonlanan genin ekspresyonuna imkan vereceği kanıtlanmıştır.
TARTIŞMA ve SONUÇ: Elde edilen sonuçlara göre, inşa edilen pADU94 vektörü kloramfenikol direnç geni, mavi-beyaz görüntüleme ve protein ekspresyonu yetisine sahip bir vektördür. pADU94 vektörünün bilinmeyen beta laktam direnç genlerinin klonlanarak karakterize edilmesinde ya da bilinen beta laktam direnç genlerinin klonlama vasıtasıyla özelliklerinin araştırılmasında kullanılabilecek uygun bir vektör olduğu belirlenmiştir.
pADU94, cloning and expression vector with chloramphenicol resistance marker
Hanife Salih, Erman ORYASIN, BÜLENT BOZDOGANAydın Adnan Menderes University, Recombinant DNA and Recombinant Protein research center (REDPROM), AydınINTRODUCTION: Nowadays, there is a need for a vector to investigate the characterization and properties of beta-lactam resistance genes by cloning. The aim of the research is to resolve the vector insufficiency to cloning of the beta-lactam resistance genes.
METHODS: Unlike the conventional restriction method of vector construction, the beta-galactosidase resistance gene in plasmid pUC19 was excluded and the vector skeleton was generated by PCR without disturbing, and the chloramphenicol resistance gene was inserted. To examine the functionality of the constructed pADU94 vector, bla, gfp and tsst cloning was performed.
RESULTS: The constructed pADU94 vector was determined to gain plasmidic chloramphenicol resistance to the cell. The cell gained plasmidic beta-lactam resistance by the cloning of bla into the pADU94. It has been proven that the pADU94 can be used for the blue white screening by the cloning of tsst into the pADU94. Also, by gfp cloning, the vector has been shown to enable expression of the cloned gene.
DISCUSSION AND CONCLUSION: According to the results, the constructed pADU94 vector is a vector has chloramphenicol resistance gene and capable of the blue-white screening and protein expression. The pADU94 vector has been found to be a suitable vector that can be used to characterize unknown beta-lactam resistance genes by cloning or to investigate the properties of known beta-lactam resistance genes by cloning.
Sorumlu Yazar: Hanife Salih, Türkiye
| ARAÇLAR |
 Tam Metin PDF Yazdır Alıntıyı İndir RIS EndNote BibTex Medlars Procite Reference Manager E-Postala Paylaş Yazara e-posta gönder
Benzer makaleler PubMed Google Scholar |