Optimization and Validation of an HPLC-UV Method for Analysis of Clozapine and its Major Metabolites in Human Plasma
Emrah Dural1, Görkem Mergen1, Görkem Mergen2, Tülin Söylemezoğlu11Ankara University Institute Of Forensic Sciences, Department Of Forensic Chemistry And Forensic Toxicology, Dikimevi/çankaya, 06590 Ankara, Turkey2Techkowledge Fz Llc, 06510 Ankara, Turkey
A simple, simultaneous and reliable HPLC method was developed for analysis of clozapine that is a widely prescribed drug especially for treatment of schizophrenia, but may have fatal toxicities in some cases. Its two metabolites are norclozapine and clozapine N-oxide in human plasma. Chromatographic conditions and detection parameters were adjusted in consequence of optimization study. An isocratic high-performance liquid chromatography method with ultraviolet detection at 220nm was utilized. Analytes are concentrated from plasma by liquid–liquid extraction with ethyl acetate, n-hexane and isopropylalcohol (80: 15: 5,v/v/v) which allows to obtain good extraction yields (>80%) for all analytes. Separation was performed on a C18 reversed-phase column using a mixture of acetonitrile and 62.4mM phosphate buffer (containing 0.3%triethylamine, pH4.5) at the ratio of 40: 60(v/v). Method showed linearity with excellent correlation coefficients (r2>0.999) for each analyte. The relative standard deviations and relative standard errors calculated to present precision and accuracy between and within-day assay were less than 4% for low concentrations. The method was specific and sensitive with detection limits of 23.6µg/L, 19.3µg/L and 23.6µg/L for clozapine, norclozapine and clozapine N-oxide respectively. The procedure described is relatively simple, precise, and applicable for routine therapeutic drug monitoring especially in psychiatry clinics or in toxicology reference laboratories.
Keywords: Clozapine, Clozapine-N-oxide, Norclozapine, HPLC-UV, OptimizationKlozapin Ve Major Metabolitlerinin İnsan Plazmasında Analizi İçin Bir Hplc-Uv Metodunun Optimizasyon Ve Validasyonu
Emrah Dural1, Görkem Mergen1, Görkem Mergen2, Tülin Söylemezoğlu11Ankara University Institute Of Forensic Sciences, Department Of Forensic Chemistry And Forensic Toxicology, Dikimevi/çankaya, 06590 Ankara, Turkey2Techkowledge Fz Llc, 06510 Ankara, Turkey
Bu çalışmada özellikle şizofreni tedavisi için yaygın şekilde reçete edilmeye başlanmış olan ancak bazı vakalarda toksisitesi ölümcül olabilen klozapin analizi için basit ve güvenilir bir HPLC yöntemi geliştirilmiştir. Klozapinin insan plazmasındaki iki ana metaboliti norklozapin ve klozapin N-oksit’dir. Kromatografik analiz koşulları ve deteksiyon parametreleri optimizasyon çalışmasının sonucunda belirlenmiştir. UV dedektörlü, izokratik yüksek performanslı sıvı kromatografisi analiz yöntemi 220nm dalga boyunda kullanılmıştır. Analitler plazmadan etilasetat, n-heksan ve izopropil alkol (80: 15: 5, v/v/v) karışımı ile sıvı-sıvı ekstraksiyon yöntemiyle konsantre edilmiş, ekstraksiyon verimi %80’nin üzerinde ölçülmüştür. Ayırım C18 ters-faz kolon ile, 40: 60 (v/v) oranında asetonitril ve 62,4 mM fosfat tamponu (%0,3 trietilamin, pH 4,5) kullanılarak yapılmıştır. Metot her analit için mükemmel korelasyon katsayısı ile (r2>0,999) doğrusallık göstermiştir. Günler arası ve gün içi kesinlik ve doğruluk için ölçülen göreli standart sapma ve hatanın düşün konsantrasyonlar için % 4’ten az olduğu belirlenmiştir. Yöntemin klozapin, norklozapin ve klozapin N-oksit için özgül ve hassastır ve belirlenme limitleri sırasıyla 23.6µg/L, 19.3µg/L and 23.6µg/L dir. Tanımlanan prosedür, özellikle psikiyatri kliniklerinde veya toksikoloji referans laboratuvarlarında kullanılabilecek, basit, kesin ve rutin tedavi edici ilaç izlemi için uygulanabilirdir.
Anahtar Kelimeler: Klozapin, Klozapin-N-oksit, Norklozapin, HPLC-UV, OptimizasyonCorresponding Author: Emrah Dural, Türkiye
| TOOLS |
 Full Text PDF Print Download citation RIS EndNote BibTex Medlars Procite Reference Manager Share with email Share Send email to author
Similar articles Google Scholar |