Obtaining Stem Cell Spheroids from Foreskin Tissue and the Effect of Corchorus olitorius L. on Spheroid Proliferation

¹Department of Biochemistry, Faculty of Pharmacy, Near East University, Nicosia
²Department of Nutrition and Dietetics, Faculty of Health Sciences, Near East University, Nicosia
³Department of Histology-Embryology, Faculty of Medicine, Manisa Celal Bayar University, Manisa
⁴Department of Pediatric Surgery, Faculty of Medicine, Near East University, Nicosia
⁵Department of Pharmacognosy, Faculty of Pharmacy, Near East University, Nicosia

INTRODUCTION: Mesenchymal stem cells are self-renewing stem cells. Human foreskin has potential to be used as a source of stem cell. The aim of the study was to obtain spheroid formation of human foreskin isolated cells (hnFSSCs) which were isolated from newborn human foreskin tissue. In addition, to further investigate the apoptotic and proliferative effects of a traditional plant Corchorus olitorius L. on hnFSSCs spheroids.
METHODS: After routine circumcision procedure the cells were isolated and cultured in suitable medium. The plant leaves was extracted with ethanol and composition analysis was done by LC-MS/MS method. The foreskin stem cells were characterized immunocytochemically for distribution of CD 45, CD34, CD 90. hnFSSC spheroids were formed using the hanging drop technique. The obtained spheroids were then stained by immunofluorescence method for distribution of caspase-3 and Ki-67 after treated with C. olitorius extract for 48 h.
RESULTS: Immunostaining analysis showed that hnFSSCs were positive for CD45, CD34 and negative for CD90. According to LC-MS/MS C. olitorius plant was rich in flavanols and hdyrocinnamic acid derivatives. The obtained spheroids were loose and floating but the cells were still intact. Caspase-3 activity was higher in control group than extract treated group and Ki-67 was higher in extracted treated group than control group suggesting that the plant might has the capacity to increase stem cell proliferation due to its rich polyphenolic content.
DISCUSSION AND CONCLUSION: The results suggest that hnFSSCs and using spheroids might be used as a part of stem cell generation and tissue repair and renewal as human foreskin tissue has potential to be used as stem cell source. C. olitorius also increased proliferation of hnFSSCs showing polyphenols might increase proliferation of stem cells.

Keywords:

Sünnet Derisinden Kök Hücre Sferoidlerinin Elde Edilmesi ve Corchorus olitorius L.'nin Sferoid Proliferasyonuna Etkisi

¹Yakın Doğu Üniversitesi, Eczacılık Fakültesi, Biyokimya Ana Bilim Dalı, Lefkoşa
²Yakın Doğu Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Fakültesi, Beslenme ve Diyetetik Ana Bilim Dalı, Lefkoşa
³Manisa Celal Bayar Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Histoloji-Embriyoloji Ana Bilim Dalı, Manisa
⁴Yakın Doğu Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Pediatrik Cerrahi Ana Bilim Dalı, Lefkoşa
⁵Yakın Doğu Üniversitesi, Eczacılık Fakültesi, Farmakognozi Ana Bilim Dalı, Lefkoşa

GİRİŞ ve AMAÇ: Mezenkimal kök hücreler kendi kendini yenileyebilme özelliğine sahiptir. Sünnet derisinin kök hücre kaynağı olarak kullanılması potansiyeli vardır. Çalışmanın amacı, yeni doğmuş insan sünnet derisi izole hücrelerinden (hnFSSCs) sferoid oluşumunu elde etmektir. Bunlara ek olarak, Kıbrıs’a özgü geleneksel bir bitki olan Corchorus olitorius L. bitkisinin hnFSSCs sferoidleri üzerindeki apoptotik ve proliferatif etkilerinin araştırılması da amaçlanmıştır.
YÖNTEM ve GEREÇLER: Rutin sünnet prosedüründen sonra hücreler izole edildi ve uygun ortamda kültür edildi. Bitki yaprakları etanol ile ekstre edildi ve içerik analizi LC-MS / MS yöntemi ile yapıldı. Sünnet derisi kök hücreleri CD 45, CD34, CD 90 antikorları kullanılarak immünositokimyasal olarak karakterize edilmiştir. hnFSSC sferoidleri asılı damla tekniği kullanılarak oluşturuldu. Elde edilen sferoidler daha sonra C. olitorius ekstraktı ile 48 saat süre muamele edildikten sonra kaspaz-3 ve Ki-67'nin dağıtımı için immünofloresan boyama yöntemiyle boyandı.

BULGULAR: İmmünoboyama analiz sonuçları, hnFSSC'lerin CD45, CD34 için pozitif fakat CD90 için negatif olduğunu gösterdi. LC-MS/MS sonuçlarına göre C. olitorius bitkisinin, flavanoller ve hidro-sinnamik asit türevleri içerdiği saptanmıştır. Elde edilen sferoidler gevşek ve yüzer vaziyette olmalarına rağmen hücreler birbirleri ile etkileşim halindeydi. Kaspaz-3 aktivitesi kontrol grubunda ekstrakt grubuna göre daha yüksekti ve ekstraksiyon uygulanan grupta Ki-67 aktivitesi kontrol grubuna göre daha yüksek bulundu. Bu sonuçlar, bitkinin polifenol içeriğinden dolayı kök hücre proliferasyonunu artırma kapasitesine sahip olabileceğini göstermektedir.
TARTIŞMA ve SONUÇ: hnFSSC'lerin ve sferoidlerin kök hücre üretimi ve doku onarımı ve yenilenmesinin bir parçası olarak kullanılabilme potansiyeli, sünnet derisinin kök hücre kaynağı olarak kullanılması durumunda mevcuttur. C. olitorius içerdiği polifenollerinden dolayı kök hücrelerin proliferasyonunu artıran etki göstermeyi başarmıştır.

Anahtar Kelimeler:

Eda Becer, Günsu Soykut, HILAL KABADAYI, Emil Mammadov, İhsan Çalış, Seda Vatansever. Obtaining Stem Cell Spheroids from Foreskin Tissue and the Effect of Corchorus olitorius L. on Spheroid Proliferation. . 2020; 17(3): 265-270

Corresponding Author: Günsu Soykut, K.K.T.C.